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MGECs細胞凍存時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的凍存培養(yǎng)基。
產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱:小鼠腎小球內(nèi)皮細胞
英文簡稱:MGECs細胞
貨號:LZ-X969980
規(guī)格:T25
生長特性:貼壁
凍存培養(yǎng)基:
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個;
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
Sorensen磷酸緩沖液(0.1mol/L,pH5.3-8.04)(-)-Epigallocatechin Gallate;表沒食子兒茶素沒食子酸酯縮酶(ADOLASE)活性比色法定量檢測試劑盒
Sorensen磷酸緩沖液(1×,pH6.2)(-)-Epigallocatechin Gallate;表沒食子兒茶素沒食子酸酯染色質(zhì)免疫沉淀分析(CHIP)試劑盒
Sorensen磷酸緩沖液(10×,pH6.2)Epimedin A;朝藿定A染色質(zhì)免疫沉淀分析(CHIP)*試劑盒(包括抗體)
TBS緩沖液(0.02mol/L,pH8.2)Epimedin A;朝藿定A人類巨病蛋白酶(HCMV PROTEASE)活性熒光淬滅法定量檢測試劑盒
TBS緩沖液(0.05mol/L,pH7.4)Epimedin B;朝藿定B人體鼻病(rhinovirus)定量PCR擴增檢測試劑盒
Tris-Maleate緩沖液(0.1mol/L,pH5.08-8.45)Epimedin B;朝藿定B人體鼻?。╮hinovirus)定性檢測試劑盒
Tris-Maleate緩沖液(1mol/L,pH5.0-8.5)Epmedin C;朝藿定C人體腺?。╝denovirus)定量PCR擴增檢測試劑盒
Tris-Maleate緩沖液(1mol/L,pH5.0-8.5)Epmedin C;朝藿定C人體腺病(adenovirus)定性檢測試劑盒
阿拉伯膠水溶液(10%)Ezetimibe;依澤替米貝/依折麥布溶酶體形態(tài)染色試劑盒
阿拉伯膠水溶液(25%)Ezetimibe;依澤替米貝/依折麥布溶酶體型酸性磷酸酶總活性比色法定量檢測試劑盒
緩沖液(5×,pH7.4)Ezetimibe;依澤替米貝/依折麥布溶酶體脂酶(酸性脂酶)活性比色法定量檢測試劑盒
鈉緩沖液(pH7.4)Erythromycin;紅霉素溶酶體脂酶(酸性脂酶)活性染色試劑盒
鈉溶液(0.1mol/L)Erythromycin;紅霉素肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶(CARNITINE PALMITOYL-TRANSFERASE)總活性比色法定量檢測試劑盒
鈉溶液(0.1mol/L)Erythromycin;紅霉素肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶I(CARNITINE PALMITOYL-TRANSFERASE I)活性比色法定量檢測試劑盒
鈉緩沖液(0.1mol/L,pH8.6)Estradiol;β-雌二肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶II(CARNITINE PALMITOYL-TRANSFERASE II)活性比色法定量檢測試劑盒
MGECs細胞XII B組磷脂酶A2(PLA2G12B)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human A1BG(Alpha-1B-glycoprotein) ELISA Kit人瘤病16型E7抗體
髓系觸發(fā)受體-1(TREM-1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SATB1 ELISA Kit人類狀瘤病58 E6蛋白抗體
黑素轉(zhuǎn)鐵蛋白(MFI2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SATB2(Special AT-rich sequence-binding protein 2) ELISA Kit人類狀瘤病16抗體
抗酸性磷酸酶(ACP5)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SBDS ELISA Kit人類狀瘤病18 E7抗體
甲狀腺原氨酸(Thyronine)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SA1 ELISA Kit人類狀瘤病31 E7抗體
脂聯(lián)素(ADP/Acrp30)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SCAP ELISA Kit轉(zhuǎn)錄因子HES2抗體
集聚蛋白(AGRN)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human SAPS3 ELISA Kit轉(zhuǎn)錄因子HES3抗體
注意事項:
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月內(nèi)推薦4℃保存,并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
如果有細菌或真菌污染,會嚴重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
如果細胞收集過程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導(dǎo)致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
用于流式細胞儀檢測時,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞,并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽性的壞死細胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。